熒光標記氧化型低密度脂蛋白是血漿中的主要膽固醇運輸顆粒，其在某些條件下被氧化修飾后形成的Ox-LDL在動脈粥樣硬化等心血管疾病的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。為了研究LDL在病理和生理過程中的作用，科學家們開發(fā)了多種標記方法，以便在細胞和分子層面進行追蹤。
首先，LDL的提取是制備的第一步。從人血漿中分離出來的LDL通過一系列的離心和沉淀步驟得到純化。得到的LDL需要在含10μMCuSO4的PBS溶液中進行氧化反應(yīng)。銅離子作為氧化催化劑，推動脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的進行。此過程中，LDL中的多不飽和脂肪酸（PUFAs）被氧化，形成一系列復(fù)雜的氧化產(chǎn)物，包括丙二醛（MDA）和4-羥烯酸（4-HNE）。這些物質(zhì)進一步與ApoB-100結(jié)合，形成希夫氏堿，從而改變LDL的結(jié)構(gòu)和功能特性。
接下來是進行熒光標記。常用的熒光標記物為DiI，這種標記物可以與LDL顆粒結(jié)合，不影響其生化特性。將DiI與已氧化的LDL孵育，通過疏水作用使DiI嵌入LDL顆粒的脂質(zhì)核心中。經(jīng)過適當?shù)姆跤龝r間后，未結(jié)合的DiI通過透析或凝膠過濾去除，最終獲得熒光標記的氧化型低密度脂蛋白，即DiI-Ox-LDL。
最后是熒光標記氧化型低密度脂蛋白的注意事項與應(yīng)用領(lǐng)域。在整個過程中，需要嚴格控制實驗條件，如溫度、pH值和反應(yīng)時間，以確保熒光探針的有效結(jié)合并且保持Ox-LDL的生物活性。制備后的DiI-Ox-LDL通常在4℃避光保存，且不可凍結(jié)。該標記脂蛋白廣泛用于研究脂質(zhì)代謝、受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用以及動脈粥樣硬化機制。
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